Het doel van deze studie is om te onderzoeken of de in vitro transfectie efficiëntie van PF14-mRNA deeltjes hoger is in medium met toegevoegd serum of plasma.
ID
Bron
Verkorte titel
Aandoening
- Overige aandoening
Synoniemen aandoening
Aandoening
Geen: het betreft fundamenteel onderzoek naar de werking van PepFect14-mRNA nanodeeltjes
Betreft onderzoek met
Ondersteuning
Onderzoeksproduct en/of interventie
Uitkomstmaten
Primaire uitkomstmaten
De primaire onderzoeksvariabelen zijn de cellulaire opname van Cy5-EGFP mRNA en
de expressie van Cy5-EGFP en EGFP mRNA, na transfectie met PF14-Cy5-EGFP mRNA
of PF14-EGFP mRNA, in de aanwezigheid van serum of plasma in het medium. Cy5-
en EGFP-fluorescentie zal worden gemeten met confocal laser scanning microscopy
(CLSM).
Secundaire uitkomstmaten
Nvt.
Achtergrond van het onderzoek
Cell penetrating peptides (CPP) kunnen een nieuw platform voor mRNA-therapieën
worden. Een voorbeeld van een CPP is PepFect14 (PF14). Dit is een oligopeptide
met meerdere positieve ladingen dat een complex kan vormen met negatief geladen
RNA. Na cellulaire opname via endocytose kan het RNA vrijkomen en tot expressie
gebracht worden door het eiwitsynthesemechanisme van de cel.
Er wordt nog steeds in vitro onderzoek gedaan naar de verschillende technieken,
efficiëntie van de transfectie en cytotoxiciteit van de cellulair levering van
mRNA met PF14-mRNA deeltjes. In in vitro transfectie experimenten worden de
cellen gegroeid in medium waar 10% serum aan is toegevoegd voor bepaalde
groeifactoren en groeistoffen. Het serum kan echter bepaalde endonucleases en
serine proteases bevatten die de PF14-mRNA deeltjes, die hoofdzakelijk uit
eiwit en RNA bestaan, zouden kunnen afbreken. Plasma bevat deze enzymen niet,
en daardoor veronderstellen we dat cellulaire transfectie met PF14-mRNA beter
werkt in medium met toegevoegd plasma in plaats van serum. Daarbij kunnen we op
deze manier de werking van de PF14-mRNA deeltjes in een fysiologische meer
relevante setting onderzoeken.
Om de efficiëntie van de transfectie met PF14-mRNA in de aanwezigheid van
plasma of serum goed te kunnen vergelijken, willen we een beetje bloed afnemen
van een gezonde proefpersoon om vers plasma te kunnen verzamelen. Zo kunnen we
het gebruik van antistollingsmiddelen zoals EDTA, citraat en heparine
vermijden, omdat deze cytotoxisch zijn voor cellen of schadelijk zijn voor de
PF14-mRNA deeltjes. Als alternatief antistollingsmiddel willen we aprotinine
gebruiken.
Doel van het onderzoek
Het doel van deze studie is om te onderzoeken of de in vitro transfectie
efficiëntie van PF14-mRNA deeltjes hoger is in medium met toegevoegd serum of
plasma.
Onderzoeksopzet
Experimentele in vitro studie: bloedafname van een gezonde donor voor gebruik
in in vitro onderzoek.
Inschatting van belasting en risico
De medische procedure, een venapunctie, is een standaard procedure en levert
een minimaal risico op voor de proefpersoon. Daarbij neemt de procedure heel
weinig tijd in beslag.
Publiek
Geert Grooteplein Zuid 28
Nijmegen 6525GA
NL
Wetenschappelijk
Geert Grooteplein Zuid 28
Nijmegen 6525GA
NL
Landen waar het onderzoek wordt uitgevoerd
Leeftijd
Belangrijkste voorwaarden om deel te mogen nemen (Inclusiecriteria)
Gezonde menselijke vrijwilligers, 18-60 jaar oud, lichaamsgewicht >50 kg.
Vrijwilligers moeten het proces van geïnformeerde toestemming kunnen en willen
voltooien.
Belangrijkste redenen om niet deel te kunnen nemen (Exclusiecriteria)
Bekend te zijn een aandoeningen te hebben waarbij bloedafname resulteert in een
meer dan minimaal risico voor de deelnemer, bijvoorbeeld hemofilie.
Een aandoening die actieve medische interventie of monitoring vereist om
ernstig gevaar voor de gezondheid of het welzijn van de deelnemer te voorkomen.
Opzet
Deelname
Opgevolgd door onderstaande (mogelijk meer actuele) registratie
Geen registraties gevonden.
Andere (mogelijk minder actuele) registraties in dit register
Geen registraties gevonden.
In overige registers
| Register | ID |
|---|---|
| CCMO | NL77254.091.21 |