Vergelijking, optimalisatie en evaluatie van nieuwe en snelle moleculair diagnostische technieken voor het aantonen van atypische bacteriële luchtwegpathogenen in klinisch materiaal van patiënten met CAP.

Bacteriële community-acquired pneumonia (CAP) is één van de meest voorkomende
infectieziekten. CAP kan worden onderverdeeld in 2 soorten: typische pneumonie,
veroorzaakt door b.v. Streptococcus pneumoniae of Haemophilus influenzae, en
atypische pneumonie, veroorzaakt door Mycoplasma pneumoniae, Legionella
pneumophila of Chlamydophila pneumoniae. Momenteel worden atypische pneumonieën
alleen behandeld wanneer er een hoge klinische verdenking is of na verergering
van de infectie. Echter, het is klinisch niet altijd mogelijk om een atypische
pneumonie te onderscheiden van een typische pneumonie. Het kan dus zijn dat
patiënten suboptimale therapie krijgen.
Isolatie door middel van kweek van atypische luchtwegpathogenen is
arbeidsintensief of onmogelijk, b.v. door transportproblemen of snel afnemende
levensvatbaarheid. Voor de meeste diagnostische laboratoria is het (te) een
grote uitdaging om deze bacteriën aan te tonen. De huidige diagnostiek is
gebaseerd op een viervoudige, of grotere, titerstijging in antilichamen
vergeleken tussen gepaard serum, afgenomen met een tussenfase van 2 weken.
Echter, dit vertraagt de diagnostiek met 2 weken. Moleculaire technieken kunnen
behulpzaam zijn in snelle en betrouwbare diagnostiek van atypische pneumonie.
Zeker nu real time PCR assay en (semi) geautomatiseerde DNA isolatie van
klinische materialen beschikbaar zijn.

Het doel van dit onderzoek is het vergelijken, evalueren en valideren van een
aantal moleculaire diagnostische technieken voor atypische bacteriële pneumonie.
Tegelijkertijd willen we vaststellen welk klinisch materiaal het meest relevant
is per pathogeen.

Deze studie volgt een prospectieve opzet. Routine diagnostiek zal bestaan uit
het aantonen van luchtweg virussen, bacteriën die typische pneumonie
veroorzaken door middel van kweek, PCR of serologie. Indien aangevraagd
uitgebreid met speciale technieken voor het aantonen van parasieten, schimmels
of mycobacteriën. Als aanvulling op deze routine zal een aantal assays worden
toegevoegd om infecties met atypische luchtwegpathogenen aan te kunnen tonen:
· Strand Displacement Amplification (SDA, BDProbeTec, Beckton & Dickinson)
· Multi Ligase Probe-mediated Amplification (MLPA, Pathofinder)
· Nucleic Acid Sequence Based (NASBA, NucliSens EasyQ, bioMérieux)
· In house PCR, MCRZ
· Virologisch PCR panel.

Als referentie zal serologische diagnostiek, d.m.v. enzym immuno assays worden
gebruikt. Zo kunnen de uitslagen van de nieuwe technieken worden vergeleken met
de "gouden standaard".

Patiënten verdacht van CAP zal worden gevraagd om mee te doen. Patiënten zullen
worden geïnformeerd door de behandelend arts en gevraagd worden om toestemming
middels een informed consent. Voor minderjarigen onder 18 worden de
ouder(s)/voogd(en) gevraagd om toestemming te geven. Minderjarigen tussen 12 en
18 jaar zullen ook zelf toestemming moeten geven.
De risico's die samenhangen met deelname zijn verwaarloosbaar en de belasting
bij het afnemen van een keelwat, een nasopharynx spoelsel en een urine kan als
minimaal worden beschouwd.
Omdat iedereen, ook minderjarigen, CAP kunnen krijgen, is het noodzakelijk om
alle patiënten te includeren.