Micro-RNA profiling van colorectaal carcinoom (CRC) en van premaligne voorlopers (adenomen) van CRC

MicroRNAs (miRNAs) zijn een recentelijk ontdekte groep van kleine (~ 22
nucleotides) niet-eiwit coderende RNA moleculen, die de gen expressie negatief
beinvloeden door te binden aan de target messenger RNA (mRNA). MRNAs zijn
betrokken bij de controle van vele fundamentele cellulaire en fysiologische
processen, zoals cel proliferatie en differentiatie, ontstaan en reguleren van
cel dood. De afgelopen jaren bestaat er steeds meer bewijs, dat miRNA*s een
belangrijke rol spelen in cel transformatie and carcinogenese. MiRNAs draaien
functioneren als oncogenen of tumor suppressor genen. OP dit moment is er
weinig bekend over de invloed van miRNA*s op de carcinogenese van colorectaal
carcinoom (CRC) en de premaligne voorlopers (adenomen). Tot op heden zijn
slechts enkele met CRC in verband gebracht: let-7, miR-10a, miR-17-92 cluster,
miR-20a, miR-24-1, miR-29b-2, miR-31, miR-96, miR-133b, miR-135b, miR-143,
miR-145 and miR-183 hebben een atypisch expressie. Wat de exacte rol is van
deze miRNAs in CRC is tot op heden onduidelijk.

Het doel van het huidige project is het analyseren van miRNA expressie typering
uit *fresh frozen* humaan colon weefsel, colorectale adenomen en carcinomen om
specifieke miRNAs of miRNA clusters te identificeren, die een veranderde
expressie hebben in colorectale neoplasieen. Het herkennen van essentiele
miRNAs en hun functie in de carcinogenese verbeterd ons inzicht in het proces
van de carcinogenese van colorectaal carcinoom en kan leiden tot de
ontwikkeling van nieuwe therapeutische opties.

Er zullen biopten worden verkregen voor routine histologische analyse in het
kader van normale patienten zorg van de poliep/tumor en van normaal weefsel.
Deze biopten worden door de afd. Pathologie beoordeeld. In het kader van deze
studie worden er vier extra biopten afgenomen (2mm) van een poliep of de tumor
en van macroscopische normaal weefsel van hetzelfde colon segment als de
poliep/tumor. Deze biopten worden bewaard in buffervloeistof (RNA-later) en
daarna ingevroren (-80C).
De miRNA typering zal worden uitgevoerd middels een LNA* gemodificeerd
oligonucleotide *array platform*, welke in ons laboratorium zijn ontwikkeld.
Deze *array* kan de volledige reeks van humane miRNAs, die geregistreerd staan
in de miRNA database als ook 150 vermeende miRNA*s detecteren. In het kort, RNA
wordt volledig geïsoleerd uit biopten van normaal, poliep en tumor weefsel.
Vervolgens wordt het RNA gelabeld middels een fluorescent label en
gehybridizeerd met Tm genormaliseerd LNA* gemodificeerde *capture probes* en
aangebracht op object glaasjes. De hybridizatie signalen worden
gekwantificeerd, geanalyseerd en gebruikt om miRNA expressie typeringen te
verkrijgen. Vervolgens worden er verscheidene statistische methoden gebruikt om
miRNA*s met een veranderde expressie te herkennen in CRC en adenomen.

Er is een klein risico op minimaal rectaal bloed verlies (kleine spoortjes op
de ontlasting) tot twee dagen na de scopie. De bioptie zelf is niet pijnlijk.
De colonoscopie zal door het afnemen van de extra biopten maximaal vier minuten
langer duren. Het meedoen aan dit onderzoek heeft geen persoonlijk voordeel
voor de participerende patient.