Expressie van factoren betrokken bij de galzuurcyclus op diverse plaatsen langs het maagdarmstelsel
Amendement: Expressie van HIF-1alpha eiwit in bovenste gedeelte van de GI tractus

Verstoringen in de galzuurcyclus veroorzaken een ophoping of een gebrek aan
galzuren, wat kan leiden tot een grote diversiteit aan ziekten van het
maagdarmkanaal, waaronder cholestatische leverziekte en Barrett's slokdarm [1,
2]. In dit proces spelen nucleaire receptoren (NRs) een essentiële rol. Ze
fungeren als galzuursensoren en beïnvloeden genen waaronder enzymen en
transporters van de galzuurcyclus. Hierdoor veranderen ze de samenstelling van
circulerende galzuren alsmede de toxiciteit en functie van galzuren [1, 3].
Moleculair biologische technieken hebben het mogelijk gemaakt de rol en functie
van NRs te verhelderen. Hoewel het vóórkomen van deze NRs in verschillende
delen van het maagdarmstelsel is bestudeerd in muismodellen, is dit in de mens
vooralsnog weinig bekend. Recente studies in de mens hebben laten zien dat NRs
als de Farnesoid X receptor (FXR) en Pregnane X receptor (PXR) geassocieerd
zijn met Barrett's esophagus en inflammatoïre darmziekte [4, 5]. Om de rol en
functie van NRs in de ontwikkeling van deze en andere ziekten van het
maagdarmstelsel te begrijpen, is kennis van NRs en de genen die zij beïnvloeden
in de regulatie van galzuurmetabolisme in gehele maagdarmkanaal van de mens
noodzakelijk.

Amendement:
Hypoxia inducible factor 1 alpha (HIF-1 alpha) is een transcriptie factor die
geinduceerd wordt door hypoxie. Verhoogde concentraties van HIF-1 alpha
moleculenin de cel komen voor na hypoxie als gevolg van verminderde afbraak via
de ubiquitine proteasoom cascade. Binding van HIF-1 alpha aan het hypoxia
respons element van diverse *HIF gereguleerde genen* leidt tot de verhoogde
transcriptie van diverse eiwitten betrokken bij angiogenese, glycolyse en
erythropoiese. De aanwezigheid van HIF-1 alpha is aangetoond op het oppervlakte
van het epitheel van gezonde dikke darm en adenomen en in gebieden geassocieerd
met peri-necrotic gebieden van adenocarcinomen van de dikke darm. Daarbij is
HIF-1 alpha overexpression bekend in de dikke darm van patienten met
ischemische colitis, ulceratieve colitis en de ziekte van Crohn*s.
Desalniettemin is de expressie van HIF-1 alpha tot op heden niet onderzocht in
normaal weefsel van het bovenste gedeelte van de gastrointestinale tractus.

Het verkrijgen van inzicht in diverse (nucleaire) receptoren betrokken bij de
regulatie van de galzuurcyclus op diverse plaatsen in het maagdarmstelsel van
de mens.

Amendement: Het bestuderen van expressie van HIF 1alpha op diverse plaatsen van
het bovenste gedeelte van het maagdarmstelsel.

Bij deze studie wordt op acht gespecificeerde locaties van het maagdarmstelsel
van patiënten (± 50) materiaal afgenomen en opgeslagen voor het opzetten van
verschillende moleculaire en immunologische experimenten. Hiervoor wordt
gebruik gemaakt van kleine stukjes weefsel (biopten) van patiënten welke
afgenomen worden tijdens de reguliere dubbelballon endoscopie op de afdeling
MDL van het Erasmus MC. Er wordt gebruikt gemaakt van de formaline gefixeerde
biopten die standaard voor diagnostische bepalingen worden afgenomen. Het
paraffine gefixeerde restmateriaal wordt gebruikt om de locatie van de
galzuurfactoren te bepalen met behulp van immunologische technieken. Daarnaast
worden er extra biopten opgevangen in een speciale buffer die gecodeerd en
opgeslagen worden in een -80°C vriezer, om op een later tijdstip RNA te
isoleren voor de bepaling van de expressieniveau's van diverse galzuurgenen.


Amendement:
Er wordt gebruikt gemaakt van de formaline gefixeerde biopten die standaard
voor diagnostische bepalingen worden afgenomen. Het paraffine gefixeerde
restmateriaal wordt gebruikt om de locatie van HIF 1alpha te bepalen met behulp
van immunologische technieken.

De tijd voor het af nemen van de extra biopten zal doorgaans rond de 5 min
bedragen (de tijd voor de standaard DBE bedraagt 90 min). De scopie zelf is een
laag risico interventie (minder dan 1 op 3000 scopieen geeft complicaties)