In vitro onderzoek naar de regulerende rol van sphingolipiden in de proliferatie van lymfocyten.

Sphingosine-1-fosfaat ( S1P) is een bioactief lipide betrokken bij een breed
scala van cellulaire processen , zoals celmigratie , differentiatie en
bescherming tegen apoptose. S1P acteert zowel cellulaire effecten door vijf
G-gekoppelde receptoren ( S1PR1-5 ) en intracellulaire effecten via interacties
met doeleiwitten. Lymfocyten hebben belangrijke functies in specificiteit,
diversiteit, zelf-tolerantie en immunologisch geheugen. Het verlaten en de
recirculatie van lymfocyten vanuit thymus en secundaire lymfoïde organen is
afhankelijk van de S1PR1 receptor. Vrijgave van T - cellen uit de thymus en de
interactie tussen T - en B - lymfocyten in secundaire lymfoïde organen is
essentieel voor de werking van het verworven immuunsysteem. Activering van
S1PR1 op de membraan van de lymfocyt leidt tot lymfopenie, waarschijnlijk als
gevolg van sequestratie van lymfocyten in secundaire lymfoïde organen.
Aangezien activering van S1PR1 leidt tot lymfopenie, lijkt ontwikkeling van S1P
agonisten veelbelovend voor immunosuppressieve therapie bij
orgaantransplantatie en auto-immuunziekten.

Meer kennis van de intracellulaire processen betreffende S1P in lymfocyten
nuttig kan zijn bij het moduleren van specifieke immuunresponsen in
orgaantransplantatie, autoimmuunziekten en sepsis. In deze studie zullen we
daarom S1P-geïnduceerde lymfocytproliferatie en de onderliggende cellulaire
mechanismen onderzoeken.

Design: in vitro met vers geïsoleerde lymfocyten. In vitro eindpunten zijn de
vaststelling van een merkbare verandering van de proliferatiesnelheid van de
lymfocyten gedurende 72 uur in de aanwezigheid of afwezigheid van specifieke
agonisten of antagonisten voor de receptoren en sphingosine-substraten of
remmers van de -kinase en -transporter (de ABC C1-transporter ) . Proliferatie
zal bepaald worden door het aantal cellen te schatten door het meten van
fluorescente signaalintensiteit via de NF celproliferatie Assay Kit (
Invitrogen Molecular Probes , Oregon , USA ) . De gemeten fluorescentiesignaal
is een continue variabele die wordt gebruikt als een surrogaat marker voor het
aantal cellen in het experiment . Statistisch verschil wordt berekend met
behulp van een student's T - toets voor onafhankelijke variabelen ( in het
geval waarin twee groepen vergeleken worden ) of een One - Way ANOVA met post -
hoc Games - Howell ( in het geval waarin drie of meer groepen zijn vergeleken )
. Gegevens zullen worden geanalyseerd met behulp van de meest recente
beschikbare versie van SPSS voor Windows.

De studie vormt een verwaarloosbaar risico voor de vrijwilliger, gezien de
enige interventie het eenmalig afnemen van bloed is. Het vergroten van onze
fundamentele kennis over de regulerende rol van sphingolipiden op
lymfocytproliferatie zou kunnen leiden tot de ontdekking van nieuwe targets
voor farmacologische modulatie van lymfocytfunctie**. Derhalve kunnen de
resultaten bijdragen aan een beter begrip van cellulaire mechanismen van het
verworven immuniteit, welke potentieel gebruikt kunnen worden voor de
ontwikkeling van specifieke immunomodulatoren om de uitkomst na
orgaantransplantatie te verbeteren of autoimmuunziekten en sepsis te
behandelen.