De rol van actief vWF bij fysiologische bloedplaatjesadhesie en aggregatie

vWF medieert bloedplaatjes adhesie en aggregatie bij het optreden van
vaatschade.1 De multimeren structuur laat vWF bloedplaatjes binden aan de
vaatwand door als het ware een moleculaire brug te vormen tussen het
blootliggende subendotheliale collageen en de bloedplaatjes GP1b receptor, met
name bij hoge bloedstroomsnelheid.2 Hoewel bloedplaatjes en vWF samen voorkomen
in de circulatie vormen ze normaal gesproken niet spontaan een complex. Bij
fysiologische omstandigheden bevinden vWF multimeren zich in een gevouwen,
globulaire vorm die het A1 domein beschermt tegen interactie met plaatjes GP1b.
Echter, na vaatschade induceert immobilizatie aan subendotheliaal collageen en
toegenomen bloedstroomsnelheid ontvouwing van vWF.3 Door deze
conformatieverandering komt het A1 domein beschikbaar voor plaatjes-vWF
interactie, vandaar de naam ''actief vWFf''.4. Omdat het neutraliseren van de
interactie van GP1b met vWF een aantrekkelijke strategie is voor het
behandelen/voorkomen van pathologische plaatjes-vWF interactie hebben andere
groepen eerder variable heavy chain antibody fragmenten (VHHs) tegen het vWF A1
domein ontwikkeld. Wij hebben ook een llama-VHH ontwikkeld die een cryptische
epitoop in het vWF A1 domein herkent die alleen beschikbaar is in actief
(geopend) vWF. Ons doel is om met behulp van verschillende functionele assays
de eigenschappen van onze VHH te karakteriseren, met andere woorden kan de VHH
de vWF-plaatjesinteractie moduleren?

Ons primaire doel is om inzicht te verkrijgen in de rol van actief vWF in de
fysiologische bloedplaatjes adhesie en aggregatie. Specifiek willen we de
volgende vraag beantwoorden:
1. Kan de VHH, gericht tegen het A1 domein van vWF, interfereren met
vWF-plaatjes binding?
Deze vraag zullen we trachten te beantwoorden door gebruik te maken van de
volgende technieken:
a. Immunosorbent assay (ELISA)
b. Flow-cytometrische plaatjesfunctie assay (PACt)
c. Licht transmissie aggregometrie (LTA)
d. Plaatjesfunctie analyzer-200 (PFA-200)
e. Volbloed perfusie test

Dit is een experimentele (in vitro) studie. Het bestaat enkel uit in vitro
experimenten waarbij volbloed wordt gebruikt (en plaatjes-rijk plasma (PRP),
plaatjes arm plasma (PPP) en gewassen plaatjes verkregen uit volbloed). Gezonde
vrijwillige donoren zullen alleen een venapunctie ondergaan in het kader van
deze studie, geen andere interventie(s).

Deze studie brengt verwaarloosbare risico's met zich mee. Deelname omvat afname
van bloed van gezonde individuen via een venapunctuur. De hoeveelheid bloed die
wordt afgenomen is afhankelijk van het experiment en varieert tussen de 3 mL
(PACt) tot 36 mL (LTA). De belasting en risico's zijn minimaal. De
experimentele data zullen geen consequenties hebben voor de donor; het bloed
wordt geanonimiseerd direct na afname en als de onderzoeker zich bewust is van
de donor zal hij/zij niet op de hoogte worden gebracht van de resultaten. De
belasting van deelname is minimaal omdat het 1 enkele venapunctie omvat.